熒光PCR之探針法

熒光PCR的探針法分為全基因組核酸探針、克隆探針、寡核苷酸探針、單鏈RNA探針、cDNA探針、蛋白質(zhì)探針以及酶探針。帶大家一起了解下寡核苷酸探針、cDNA探針、RNA探針的特點。寡核苷酸探針特異性較高，區(qū)別染色體上一個堿基的突變；由于其鏈短，分子量小，雜交時間較短（僅需1-2小時），可預測雜交條件，可直接利用DNA序列人工合成獲得特異片段而無需分子克隆，獲得探針相對容易。但是由于其鏈短致使標記率較低，也影響了檢測的敏感性，僅能檢出含很少的標本。cDNA探針以RNA為模板，用反轉(zhuǎn)錄酶合成單鏈cDNA探針。主要用來分離cDNA文庫中相應的基因。RNA探針一般是單鏈，具有單鏈DNA探針的優(yōu)點，又具有RNA：DNA雜交體比DNA：DNA雜交體有更高的穩(wěn)定性，所以在雜交反應中RNA探針比相同活性的DNA探針所產(chǎn)生信號要強。熒光定量PCR類產(chǎn)品的組成方式通常為：1管反應緩沖液+1管酶的形式。其中反應緩沖液包含熒光PCR反應緩沖系統(tǒng)、引物、探針、dNTP；酶包含Taq酶、UNG酶。這種形式的產(chǎn)品使用方法復雜，必須先將反應緩沖液和酶按照比例混合均勻后，分裝至PCR擴增管中，然后再加入樣本。由于酶的用量通常較少（≤0.5μL）、酶液較粘稠，且配制過程繁瑣，配制誤差較大、反應重復性不好。熒光PCR凍干的試劑凍干機Pilot5-8T技術要點：

1. 完整的PAT控制技術，可對凍干過程進行完整的控制和分析監(jiān)控。包括預凍全過程控制、預凍結束判定、升華全過程控制、升華結束判定、解析全過程控制及凍干結束判定。
2. 板層溫度均一度±1℃。
3. 系統(tǒng)極限真空度±1Pa。
4. 系統(tǒng)真空泄露率＜3Pa.L/S。
5. 外界干擾熱量屏蔽。
6. 共晶點測試儀助力工藝開發(fā)。

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